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研究幾種酸純化的具體方法

更新時間:2017-06-19      點(diǎn)擊次數(shù):1759
  今天來介紹幾種酸純化的具體方法,以核酸為例,核酸抽提與純化是分子生物學(xué)試驗(yàn)的基礎(chǔ),核酸純化方法是影響提取核酸質(zhì)量高低的zui重要因素,也是下游分子生物學(xué)試驗(yàn)成敗的關(guān)鍵。
  1.PC抽提法
  PC抽提是去除蛋白質(zhì)有效的手段,但超過了該飽和度,裂解體系中的蛋白質(zhì)不會被一次去除,必須靠多次抽提,方可*去除。且每次抽提都會損失部分核酸。另外,體系太粘稠的壞處是,蛋白質(zhì)難以*去除,以及基因組DNA會斷裂得更厲害,所以要注意裂解液與樣品的比例。PC抽提的另外一個用途是,利用酸性酚可以部分去除DNA的特點(diǎn),在RNA抽提時獲得DNA殘留極少的RNA。不過有一點(diǎn)要提醒的是,某些植物樣品,在去除某些雜質(zhì)之前,是不能使用PC抽提的,否則核酸必定降解。PC抽提zui大的優(yōu)勢是成本低廉,對實(shí)驗(yàn)條件要求較低,對于經(jīng)費(fèi)緊張的實(shí)驗(yàn)室較為實(shí)用。
  2.離心柱法
  離心柱酸純化法,是目前試劑盒提取廣泛應(yīng)用的方法。其zui大特點(diǎn)是受人為操作因素影響小,純度的穩(wěn)定性很高(雖然純度不一定比PC純化方法更高)。加入的液體通過離心后會進(jìn)入另外一個離心管中,與含有核酸的柱子*是分開的,所以洗滌更*。其致命弱點(diǎn)是樣品過量,提取效率較低,且需要反復(fù)離心,操作復(fù)雜,成本也較高。
  3.生物磁珠法
  生物磁珠法是將純化介質(zhì)包被在納米級生物磁珠表面,通過介質(zhì)對核酸的吸附,在外加磁場下使核酸附著于磁珠定向移動,從而達(dá)到固液分離純化的作用。
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