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首頁(yè)-技術(shù)文章-【ISCO】將TLC與等度洗脫分離相關(guān)聯(lián)Rf到CV轉(zhuǎn)換

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【ISCO】將TLC與等度洗脫分離相關(guān)聯(lián)Rf到CV轉(zhuǎn)換

更新時(shí)間:2024-09-24       點(diǎn)擊次數(shù):917
一、應(yīng)用概述

在使用Teledyne ISCO的CombiFlash®系統(tǒng)時(shí),或者在純化沒(méi)有色團(tuán)的化合物時(shí),可以使用薄層色譜法(TLC)來(lái)定位收集到的餾分中的純化化合物。


   

如果已知化合物的保留因子(Rf),則可以根據(jù)柱體積估計(jì)含有所需物質(zhì)的餾分收集管。柱體積是裝填柱的空隙(空余)體積。這一規(guī)格在所有RediSep®色譜柱的色譜應(yīng)用說(shuō)明3中都有列出。


   

了解Rf和柱體積可以讓您大致了解化合物可能位于哪些餾分收集管的范圍。


   

二、一般方法    

將待分離的化合物加載到TLC板上,并分離成幾個(gè)種類。


   

控制參數(shù)    

TLC的幾個(gè)參數(shù)必須保持一致以獲得良好的相關(guān)性。

• TLC溶劑應(yīng)以體積比的方式量取,以便混合物在轉(zhuǎn)移到梯度生成系統(tǒng)時(shí)保持恒定。

• 為了獲得最佳結(jié)果,建議對(duì)層析室和板進(jìn)行平衡。

• 推薦將板運(yùn)行至距離板頂部1-4厘米以內(nèi),以實(shí)現(xiàn)良好的分離。

• 在運(yùn)行板之前,應(yīng)標(biāo)記樣品斑點(diǎn)位置和溶劑水平。

• 應(yīng)在運(yùn)行結(jié)束時(shí)標(biāo)記溶劑洗脫高度和樣品斑點(diǎn)位置。

• 在進(jìn)行TLC時(shí),層析室中的溶劑水平絕不能觸及樣品,并且應(yīng)覆蓋層析室以維持氣相中的平衡。


   

假設(shè)    

有幾個(gè)假設(shè):

• 色譜柱和TLC板使用相同類型的固定相。

• TLC方法中使用的溶劑與液體分離中使用的溶劑相同。

因此,液體分離必須是等度洗脫。

• TLC的Rf應(yīng)小于0.5且大于0.1,如果不是這樣,則可能需要不同的溶劑系統(tǒng)。


   

Rf    

Rf — 保留因子。樣品斑點(diǎn)移動(dòng)的距離。Rf通過(guò)以下公式計(jì)算:

   

Zx — 斑點(diǎn)從其起始點(diǎn)(樣品線)移動(dòng)的距離。請(qǐng)參考圖1和圖2。
   

Zf — 從原始溶劑線到最終溶劑前沿的距離。

Z0 — 從溶劑線到樣品線的距離。

       

圖1:TLC起始

   

圖2:TLC完成


柱體積相關(guān)性    

一旦知道了混合物中某個(gè)組分的Rf,就可以與柱體積(CV)建立相關(guān)性。


   

如果Rf值在0.1和0.5之間,它可以被輸入到以下公式中,以給出收集管的范圍。

   

其中:

Volc — 柱的空隙體積。

Volf — 每個(gè)管中收集的餾分體積。


   

三、示例 

請(qǐng)參考圖3。


   

圖3:TLC示例


一個(gè)丙酮斑點(diǎn)洗脫了62毫米(Zx=62毫米),溶劑水平到水平樣品線的距離是8毫米(Z0=8毫米),溶劑前沿移動(dòng)的距離是170毫米(Zf=170毫米)。Rf是無(wú)量綱的,所以單位被省略,進(jìn)行計(jì)算:


   


為了將這與通過(guò)柱體積為16.8 mL的12克RediSep柱進(jìn)行的純化相關(guān)聯(lián),并收集為10 mL的餾分,將Rf應(yīng)用到以下公式中:


   
   


四、計(jì)算機(jī)

人們可以輕松使用Microsoft® Excel®或其他電子表格程序來(lái)創(chuàng)建Rf和試管相關(guān)性計(jì)算器:


   

圖4:Rf和試管相關(guān)性計(jì)算器


   

五、參考    

Colin F. Poole and Salwa K. Poole, “Chromatography Today", Elsevier Science Publishers B.V., 649-667, (1991).

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